熒光光譜儀是一種基于光譜分析技術(shù)的光譜分析儀器,主要組成部分包括光源、激發(fā)單色器、樣品池、熒光單色器及檢測器等。
1.光源
早期的熒光分光光度計,配有能發(fā)生很窄汞線的低壓汞燈。使用高壓汞燈,譜線被加寬,而且也存在高強度的連續(xù)帶。然而,一個完整的激發(fā)光譜的測定需一種能發(fā)射從可見到紫外范圍的較高強度的光輻射的燈。氙弧燈能適于此條件,因此,它是目前在熒光分光光度計中最廣泛使用的光源
2.單色器
單色器的作用是把光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解成單色光,并能準(zhǔn)確方便地“取出”所需要的某一波長的光,它是光譜儀的心臟部分。單色器主要由狹縫、色散元件和透鏡系統(tǒng)組成,其中色散元件是關(guān)鍵部件。色散元件是棱鏡和反射光柵或兩者的組合,它能將連續(xù)光譜色散成為單色光。
(1).棱鏡單色器
棱鏡單色器是利用不同波長的光在棱鏡內(nèi)折射率不同將復(fù)合光色散為單色光的。棱鏡色散作用的大小與棱鏡制作材料及幾何形狀有關(guān)。常用的棱鏡用玻璃或石英制成。可見分光光度計可以采用玻,它適用于紫外、可見整個光譜區(qū)。
(2).樣品池
熒光儀用的樣品池需用低熒光的材料制成,通常用玻璃和石英材料,形狀以方形和長方形為宜。
3.檢測器
主要有硒光電池、光電管和光電倍增管等。目前來說由于熒光的強度較弱,一般以光電倍增管作檢測器。選擇光電倍增管要考慮響應(yīng)波長、靈敏度和噪聲水平等。藍(lán)敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用,而紅敏管則適用于熒光染料檢測。
儀器要求具有高的分辨率和信噪比、更好的強度準(zhǔn)確性和波長準(zhǔn)確性以及強的抗外界干擾性和優(yōu)良的儀器穩(wěn)定性,在儀器的軟件上,要求能夠進(jìn)行導(dǎo)數(shù)、去卷積等復(fù)雜的數(shù)學(xué)計算,能夠計算光譜間相似度、模式識別分析、支持多元校正分析和用戶自建譜庫并進(jìn)行檢索。
析結(jié)果